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[溃疡性结肠炎]溃疡性结肠炎患者粘附分子的变化意义

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更多 发布于:2012-09-06 00:42
济南军区总医院消化科 山东省济南市 250031
江学良,男,1967-08-26生,山东省安丘市人,汉族. 1990年苏州医学院毕业,1993年山东医科大学医学硕士,发表论文20篇,
参编专著2部,获军队科技进步奖2项.
项目负责人
江学良,250031,济南军区总医院消化科,山东省济南市师范路25号.

收稿日期 1997-09-02

摘要

目的  研究溃疡性结肠炎(UC)患者部分粘附分子的变化意义.

方法  用流式细胞术测定34例UC患者(男14例,女20例,平均年龄31.4岁)组织及血液中粘附分子CD44、可溶性粘附分子P选择素(CD62)、可溶性细胞间粘附分子-1(ICAM-1,CD54)的变化,并与20例正常人(男8例,女12例,平均年龄30.6岁)比较.

结果  UC患者组织和血液中CD44(20.3%±8.3%,19.4%±6.3%),CD62 p (5.3%±2.6%)、CD54(18.3%±5.9%)较正常人(9.7%±4.6%,7.8%±4.5%,1.9%±0.91%,6.2%±3.7%)明显升高(P<0.01),缓解期UC患者上述指标(15.2%±7.8%,14.4%±6.8%,3.8%±2.4%,13.7%±5.4%)较活动期(26.1%±10.2%,23.8%±7.9%,6.9%±3.7%,24.1%±6.7%)显著下降(P<0.05),但仍明显高于正常人(P<0.05). 组织中CD44含量与外周血中接近(P>0.05),但伴有重度不典型增生者明显升高(34.7%±4.6% vs 26.1%±4.2%,P<0.05).

结论  粘附分子水平增加在UC的发病机制中起重要作用,对判断或监测UC患者病情进展及活动转归具有一定意义.
主题词 结肠炎,溃疡性/代谢;抗原,CD44/代谢;胞间粘附分子1/代谢;P选择素/代谢

江学良, 权启镇, 孙自勤, 王要军, 齐风. 溃疡性结肠炎患者粘附分子的变化意义. 华人消化杂志, 1998;6(1):54-55


0  引言

粘附分子是一类具有多种生物功能的受体型跨膜糖蛋白,能介导细胞粘附、趋化、淋巴细胞归巢等作用,参与炎症和免疫反应,在机体的生理和病理过程中发挥作用. 近年来,粘附分子与溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)的关系开始引起人们的重视1. 作者用单克隆抗体作分子探针,用流式细胞术同时检测组织和血液中吞噬细胞膜糖蛋白(CD44)、可溶性粘附分子P选择素(CD62p)、可溶性细胞间粘附分子-1(ICAM-1,CD54),探讨其在UC发病机制中的作用.

1 对象和方法

1.1 对象
UC患者34例,男14例,女20例,平均年龄31.4岁,均符合1993年太原全国慢性非感染性肠道疾病学术研讨会制订的溃疡性结肠炎诊断标准2. 其中活动期24例,缓解期10例,正常人对照组20例,男8例,女12例,平均年龄30.6岁,均为健康查体者.

1.2 方法 ①主要试剂:异硫氰酸荧光素(FITC)标记的单克隆抗体,鼠抗人P选择素 (CD62 p-FITC),鼠抗人吞噬细胞膜糖蛋白抗体
(CD44-FITC),鼠抗人细胞间粘附分子(CD54-FITC),同种荧光素标记的阴性对照羊抗鼠IgG1-FITC,均为法国Immunotech产品.  FACScan流式细胞仪(美国BD公司生产). ②CD44、CD54的检测:(a)组织中CD44 样本的制备:取溃疡边缘新鲜组织0.2g~1.0g,置于重叠的100目铜网及260目尼龙网上,用眼科剪剪成1.0mm×1.0mm×1.0mm碎块,然后用眼科剪轻搓. 边搓边用磷酸缓冲液(PBS)冲洗入小烧瓶中,直至组织搓净. 1500r/min,离心5min,再以PBS洗2次,1000r/min,离心2min,弃上清液后加700ml/L乙醇固定,4℃保存备用. (b)血液样本CD44、CD54的制备,分别取肝素抗凝血2ml,重层于淋巴细胞分离液上,1500r/min,离心15min,提取其中淋巴细胞层,再以PBS 3ml洗2次,弃上清后用700ml/L乙醇固定,4℃备用.  将(a)、(b)制备的细胞悬液分3管,每管100μl,一管加入 20μl CD44FITC单抗溶液,一管加入20μl CD54-FITC,另一管为阴性对照,加20μl羊抗鼠IgG1-FITC,室温避光反应5min, PBS洗1次,弃上清液,以除去未结合的抗荧光抗体. ③血液中CD62p的检测:取静脉血2ml,20g/L EDTA抗凝,1500r/min离心5min,取上清液,以80g/L多聚甲醛室温固定15min,用PBS漂洗3次,2000r/min,离心5min,调整血小板浓度为300×109/L,将20μl CD62 p-FITC及IgG1-FITC分别加入上述富含血小板血浆100μl中,混匀室温避光30min,用PBS洗一遍,弃上清,上机. ④流式细胞仪检测:光源488nm的氩离子激光,FITC受激发后发出绿色荧光. 上机前先以标准微球调整仪器,使变异系数在2%以内,上机后收集20 000~50 000个细胞,荧光强度以对数放大,光散射数据存软盘,测试完后在Macintosh 650计算机上用Cell Quest Plot软件程序(美国BD公司生产)分析数据,用Hp1200 c/PS打印结果.

2  结果

与正常人相比,UC患者组织和血液中CD44、CD54、CD62p含量均明显升高(P<0.01,表1),缓解期UC患者较活动期显著下降(P<0.05),但仍明显高于正常人(P<0.05). 组织中CD44 含量与血液中接近(P>0.05),但3例伴重度不典型增生者组织中CD44含量(34.7%±4.6%)明显高于外周血中(26.1%±4.2%,P<0.05).

表1 UC患者组织和血液中CD54、CD44、CD62p含量变化 (x-±s, %)
组 别nCD44组织CD44血液CD54CD62p
正常人209.7±4.67.8±4.56.2±3.71.9±0.91
UC患者3420.3±8.2b19.4±6.3b18.3±5.9b5.3±2.6b
活动期2426.1±10.2b23.8±7.9b24.1±6.7b6.9±3.7b
缓解期1015.2±7.8a,c14.4±6.8a,c13.7±5.4a,c3.8±2.4a,c

aP<0.05,bP<0.01,vs 正常人;cP<0.05,vs 活动期.

3  讨论

粘附分子CD44 是一个重要的膜糖蛋白,具有以下主要功能3:①参与周围细胞和细胞间质成分的粘附;②是T淋巴细胞的归巢受体;③与药物的摄取和敏感性有关;④与恶性肿瘤的发生和转移有关. 对CD44与UC的关系研究甚少,用流式细胞免疫学方法对UC组织细胞CD44含量的定量研究尚未见报告. 本研究发现,UC患者CD44含量较正常人明显升高(P<0.01),说明CD44 在UC发病机制中起一定作用. 活动期UC患者CD44含量升高更为明显,提示CD44 与疾病活动性有关. 缓解期UC患者CD44 含量较活动期显著下降,但仍明显高于正常人,是否对疾病复发或预后有预测意义尚待进一步探讨. 组织中和外周血淋巴细胞CD44 含量接近,但伴重度不典型增生者组织中CD44含量明显高于血液中,为UC恶变提供重要信息.
      P选择素属粘附分子选择素家族的组分之一,由活化血小板、内皮细胞分泌表达,并可作为这些细胞活化的标志,介导中性粒细胞和单核细胞对活化血小板和内皮细胞的粘附. 根据文献报道和我们的经验,CD62 p是活化血小板最特异和敏感的分子标志物1. 本研究发现,UC患者P选择素较正常人明显升高,表明血小板处于高活化状态,其在UC发病机制中可能的作用1:①活化的血小板通过局部释放炎症介质、化学趋化物(如PF4、PAF)及激活其他炎症细胞参与和增强肠粘膜炎症过程;②血小板活化及其衍生的TXA2易使血小板聚集阻塞肠粘膜微循环,加重肠粘膜缺氧、损伤;③血小板衍生因子(成纤维细胞和单核细胞的化学诱导剂)从活化的血小板释放出来,在组织损伤后的修复中起重要作用.
     细胞间粘附分子-1(CD54)表达于内皮细胞、上皮细胞、成纤维细胞、白细胞和多种类型的肿瘤细胞. 1991年Seth et al4用免疫印迹方法首次证实人血清中存在可溶性CD54,并具有以下特征:①含有膜表面CD54分子的大部分细胞外功能区;②具有与其配体淋巴细胞功能相关抗原(LFA-1)结合的能力;③与白细胞表面的LFA-1配体结合能阻止白细胞与组织固有细胞之间的粘附. 本研究采用流式细胞免疫学方法检测UC患者循环中可溶性CD54,较正常人明显升高,尤以活动期升高更为明显,缓解期则显著下降,表明CD54与UC活动和转归有一定关系. 由于CD54主要介导细胞与细胞间的粘附作用,在组织炎症的产生过程中,随着浸润的炎症细胞及组织固有细胞的活化,CD54的表达被上调,高表达的CD54又可进一步促进炎症细胞的浸润,引起并加重组织损伤.
     本研究还可能提示针对粘附分子的药物具有一定的治疗价值. 如P选择素抑制剂不仅可预防外周和肠微血管血栓形成,而且影响中性粒细胞等在炎症反应中的形成5;抗CD54单抗具有较好的抗炎特性.

致谢 本研究得到济南军区总医院流式细胞室尹格平博士及孙晓明主管技师的帮助,特此致谢.

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